Суспензия

Суспензия.  Общий вид. "Полуконтактный" метод.

Рис. 1 (а, б)

a) – эритроциты макаки резус, осажденные из суспензии. IC mode Форма относительно мягких эритроцитов млекопитающих искажается даже под действием соседних клеток.
b) - Эритроциты петуха. IC mode.  Имеющие ядро эритроциты птиц являются более жесткими по сравнению с эритроцитами млекопитающих и не искажаются при взаимном контакте.
 

Осаждение клеток из суспензии - более равновесный процесс, чем получение   мазка. Оно применяется, когда необходимо получить распределение клеток крови по формам и размерам в отсутствие механических искажений. Дополнительным преимуществом применения суспензий клеток крови является возможность модельных экспериментов с клетками. Можно изучать действие на клетки физических или химических воздействий, например лекарств или вирусных частиц  (см. Вирус-клеточное взаимодействие).
Однако, получение препарата несколько сложнее. Существует опасность внесения искусственных искажений формы  или строения мембраны, связанных с изменением рН  или ионной силы буфера (см. артефакты приготовления). Для приготовления суспензии  каплю свежей крови смешивают с антикоагулянтом  (ЭДТА, цитрат натрия, гепарин). Неизбежное нарушение баланса между белками крови и солями буфера приводит к кристаллизации солей в процессе обезвоживания,  проявляющихся на скане и искажающих форму эритроцитов. Удаление солей с помощью дистиллированной воды приводит к отрыву от подложки  сорбированных на ней клеток. Поэтому при работе с суспензиями следует или использовать иммобилизацию клеток с помощью агентов, связывающих клетки с подложкой (например, полилизин), или переводить клетки перед осаждением на подложку в дистиллированную воду. Последнее требует предварительной химической фиксации клеток,  чтобы избежать повреждений и искажений формы, вызываемых низкой ионной силой. Мы использовали метод фиксации клеток параформальдегидом с последующим переводом клеток в дистиллированную воду.
Отметим, что искажения формы эритроцитов могут наблюдаться и при суспензионном случае при контакте двух или нескольких клеток. Поэтому для изучения изменений формы следует выбирать одиночно расположенные объекты.